Перейти к контенту
poddon-m.ru

poddon-m.ru

Медицинский портал

Каким бактериофагом лечить клебсиеллу пневмонию

Рубрика: ПневмонииАвтор:

Антибиотики или бактериофаги?

В недалеком будущем вирусы, уничтожающие бактерии, придут на смену антибиотикам

Эра антибиотиков закончилась — возникли устойчивые к самым сильным препаратам штаммы бактерий. Некоторые из них могут использовать антибиотик как среду обитания. Чем же теперь лечить инфекции, от которых умирали наши прабабушки и прадедушки?

Антибиотический тупик
Рынок антибиотиков в России за пять лет вырос более чем в два раза. Как утверждает маркетинговое исследование компании BusinesStat, это выгодный бизнес. «Продажи антибиотиков растут благодаря высокому спросу, который во многом обусловлен тем, что микроорганизмы быстро становятся резистентными к новым препаратам, поэтому существует необходимость постоянно расширять ассортимент. Кроме того, микроорганизмы становятся все более агрессивными: если раньше некоторые заболевания можно было вылечить одним уколом, то теперь требуется длительный курс лечения», — говорится в отчете компании. По данным аналитиков, в домашних аптечках 90 процентов россиян есть упаковка тех или иных препаратов антибактериального спектра.


Klebsiella pneumonia: знайома незнайомка. Л.В. Згржебловська

Беда в том, что кроме нелегких и долговременных последствий бесконтрольного применения антибиотиков существует еще одна проблема. По словам академика Валентина Власова, директора Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, в мире сложилась непростая ситуация с лечением устойчивых к антибиотикам заболеваний.

В США внутрибольничными инфекциями, порожденными антибиотикорезистентными бактериями, заражается около двух миллионов человек. Из них гибнет 23 тысячи пациентов, таковы данные американского Национального центра по контролю и профилактике заболеваний. В России достоверная статистика отсутствует. Впрочем, Геннадий Онищенко, главный государственный санитарный врач Российской Федерации, утверждает, что наибольшее число случаев внутрибольничных инфекций зарегистрировано в родильных домах и хирургических стационарах.

Штучка с ручкой
— Большинство инфекционных болезней вызывают бактерии. А у них есть враги, которые их убивают. Это бактериофаги, — рассказал академик Власов на брифинге в Институте химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН. — У нас есть шанс далеко шагнуть вперед, поскольку фаги испытывали только в СССР. На Западе исследований не проводили, поэтому у них нет официальных разрешений для их применения.

Похожие темы:
Пневмония в стадии полного разрешения
Доклад пневмония у детей
Сроки затяжного течения пневмонии

С 40-х годов прошлого века СССР был лидером в производстве и применении лечебно-профилактических бактериофагов. На Западе, напротив, в те же годы прошлого века от исследований в этой области отказались после открытия пенициллина. Сейчас препараты-бактериофаги выпускают в четырех филиалах федерального государственного унитарного предприятия НПО «Микроген». Российские препараты-бактериофаги можно свободно купить в обычной аптеке. Но широкому применению бактериофагов, по словам академика Власова, мешает то, что врачи пока не умеют назначать их правильно.

В Институте химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН получены очередные обнадеживающие результаты исследований применения бактериофагов в новых областях медицины.

— Есть страшное осложнение диабета — диабетическая стопа. Ее не берет ни один антибиотик, — рассказывает руководитель группы микроскопических исследований доктор биологических наук Елена Рябчикова, показывая фотографии, полученные с помощью электронного микроскопа. На них фаги с длинными хвостами атакуют синегнойную палочку. — Такая вот штучка с ручкой, оказывается, может много что сделать.


Лечение бактериофагами: когда антибиотики уже не помогают

По ее словам, результаты по бактериофагам показывают, что инфекция излечивается. Больные диабетом могут избежать ампутации стопы, которая увеличивает смертность от заболевания в два раза и повышает стоимость его дальнейшего лечения в три раза.

Как рассказал руководитель Центра коллективного пользования «Геномика» Сибирского отделения Российской академии наук Марсель Кабилов, сейчас продолжается активный поиск бактериофагов с новыми уникальными свойствами.

Кто кого ест
Фаги — это уникальные живые существа. По сути, это вирус, своеобразное устройство для временного хранения генома. Хвостики бактериофагов прикрепляются к конкретным рецепторам на поверхности бактерии-хозяина. Когда фаг заражает бактерию, то геном, находящийся внутри его белковой оболочки, начинает программу своего развития. Именно в ходе этого процесса и разрушается бактерия: в конечном итоге разрывается ее клеточная стенка, потомство фага освобождается и готово заражать новые бактерии. Количество «молодых» фагов варьирует между 50 и 200 единицами. Таков цикл развития истинно вирулентных фагов, наиболее востребованных для фаготерапии.

Фаги успешно «едят» синегнойную палочку, разные виды стафилококков, клебсиеллу, сальмонеллу, стрептококки… Это означает излечение от таких заболеваний, как дисбактериоз, различных воспалений: цистита, холецистита, острого тонзиллита, плеврита. Успешно поддаются лечению гнойные инфекции, сепсис, дизентерия, сальмонеллез и брюшной тиф.

Важное отличие бактериофагов от лечения прочими антибактериальными препаратами — это, если можно так выразиться, экологичность процесса. Бактериофаги, по понятным причинам, не имеют противопоказаний, побочных токсических и аллергических реакций. Поэтому их можно использовать для лечения новорожденных, беременных и кормящих женщин. Напомним, что максимальная концентрация не поддающихся лечению антибиотиками инфекций наблюдается прежде всего в родильных домах.


594 Клебсиелла в мазке у женщин

Также бактериофаги можно применять наряду с антибиотиками и любыми другими лекарственными средствами. Действие их проявляется не более чем через четыре часа после введения, что позволяет использовать их в реанимации. Бактериофаги успешно применимы не только в медицине, но и ветеринарии.

КСТАТИ
В России и странах СНГ препараты бактериофагов применяют для профилактики и лечения:
— инфекционных поражений желудочно-кишечного тракта: дизентерия, брюшной тиф, сальмонеллез, дисбактериоз и др.;
— гнойно-воспалительных заболеваний глаз, ушей, носа, ротовой полости, горла, легких: отит, ангина, фарингит, стоматит, пародонтит, конъюнктивит, гайморит, франтит, пневмония и пр.;
— хирургических инфекций: обработка послеоперационных и гноящихся ран, гнойные поражения кожи, перитонит и др.;
— ожоговых ран;
— урогенитальных инфекций: цистит, пиелонефрит, вульвит и пр.
Традиционной формой выпуска бактериофагов является жидкий препарат (кроме таблетированных форм кишечных фагов), поэтому фаги используют для приема через рот, в виде клизм, аппликаций, орошений, введения в полости.

ФАКТ
Открыл бактериофаги британский бактериолог Эрнест Ханкин в 1894 году. Он доказал, что вода индийских рек Ганг и Джамна обладает значительной антибактериальной активностью, которая полностью исчезает после кипячения, но сохраняется после фильтрации через тончайшие фарфоровые фильтры

Похожие темы:
Доклад пневмония у детей
Доклад пневмония у детей
Лечение в больнице при пневмонии

Автор:  Елена Емельянова

Источник: sovsibir.ru



Использованные источники: https://gmpnews.ru/2013/10/antibiotiki-ili-bakteriofagi/

ОФС.1.7.1.0002.15 Бактериофаги лечебно-профилактические

Содержимое (Table of Contents)


Как установить диагноз пневмония? - Доктор Комаровский

Вводится впервые

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Настоящая фармакопейная статья распространяется на лечебнопрофилактические бактериофаги, лекарственные средства, содержащие комплексы поликлональных вирулентных вирусов бактерий, которые вызывают гибель соответствующих им видов бактерий за счет внутриклеточного размножения и разрушения бактериальной клетки, сопровождающегося выходом зрелых фаговых частиц, способных к заражению новых бактериальных клеток.Бактериофаги являются вирусами бактерий. По типу взаимодействия с бактериальной клеткой фаги подразделяются на вирулентные (вызывающие гибель бактерий) и умеренные, которые, инфицируя бактериальную клетку, встраиваются в ее генетический аппарат и репродуцируются в процессе деления клетки, не вызывая ее лизис. В медицине бактериофаги используют для лечения и профилактики гнойно-септических и кишечных инфекций, а также в диагностических целях для индикации, видового и внутривидового дифференцирования бактерий.

Лечебно-профилактические бактериофаги содержат только вирулентные фаги. Эти препараты представляют собой стерильные очищенные фильтраты фаголизатов соответствующих видов бактерий, освобожденные от эндо- и экзотоксинов, продуктов фаголизиса бактериальных клеток, а также их антигенных комплексов и белковых компонентов питательных сред.

Благодаря строгой специфичности действия лечебно-профилактические бактериофаги, в отличие от антибиотиков, не угнетают нормальную микрофлору, не подавляют иммунной защиты, не обладают токсическим действием и не вызывают аллергизации. Наличие резистентности бактерий к антибиотикам не влияет на литическую активность бактериофагов.


Klebsiella

Лечебно-профилактические бактериофаги применяют для лечения и профилактики гнойно-воспалительных заболеваний и кишечных инфекций, коррекции дисбиотических состояний. Главным условием клинической эффективности при назначении бактериофагов является фагочувствительность бактерий-возбудителей.

Лечебно-профилактические бактериофаги по своему составу подразделяются на (таблица ):

—  монокомпонентные бактериофаги – лекарственные средства, содержащие вирулентные фаги против одного рода или вида бактерий;-  комбинированные бактериофаги – лекарственные средства, содержащие несколько видов монокомпонентных бактериофагов.Активность этой группы лекарственных средств выражают в показателях титра максимального разведения, дающего полный фаголизис соответствующих препарату видов бактериальных штаммов, определяемый по методу Аппельмана. Показатели специфической активности для каждого препарата указаны в соответствующих фармакопейных статьях.Лечебно-профилактические бактериофаги используют для перорального, наружного, местного, ректального применения, интраназального и конъюнктивального введения, введения в дренированные полости. Их выпускают  в различных лекарственных формах — в растворах, в виде таблеток, суппозиториев, линиментов, мазей (табл.)

Похожие темы:
Кровь изо рта при пневмонии
Какой кашель при лечении пневмонии
Лечение пневмонии при бронхиальной астме

Таблица — Лечебно-профилактические бактериофаги и их целевая направленность

Наименование

препарата

бактериофага

Специфическая направленность
Монокомпонентные
СтафилококковыйStaphylococcus spp. (S. aureus)
СтрептококковыйStreptococcus spp. (в том числе, Enterococcus spp.)
Псевдомонас аеругиноза

(синегнойный)


Антибиотики при воспалении легких - Доктор Комаровский - Интер
Pseudomonas aeruginosa
КолиEscherichia coli
ПротейныйProteus mirabilis и P. vulgaris
Дизентерийный поливалентныйShigella flexneri 1,2,3,4,6 сероваров;

S.sonnei

БрюшнотифозныйSalmonella typhi
Сальмонеллезный

гр. АВСДЕ

S.typhimurium, S. paratyphi A, S.paratyphi B,

S. heidelberg, S. newport, S. choleraesuis, S. oranienburg, S.infantis, S. dublin, S. enteritidis, S. anatum, S. newlands

Клебсиелл пневмонииKlebsiella pneumoniae
Комбинированные
Коли-протейныйE. coli, P. mirabilis и P. vulgaris
Клебсиеллезный поливалентныйK. pneumoniae, K. ozaenae, K. rhinoscleromatis
Пиобактериофаг поливалентный очищенныйStaphylococcus spp., Streptococcus spp., P. mirabilis, P.vulgaris, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae
Секстафаг®

Пиобактериофаг поливалентный

Staphylococcus spp., Streptococcus spp., P. vulgaris, P.mirabilis, P. aeruginosa, K. pneumoniae, E. coli
Пиобактериофаг комплексныйStaphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., P. mirabilis, P. vulgaris, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae, K. oxytoca
ИнтестиS. flexneri 1, 2, 3, 4, 6 сероваров, S. sonnei, S. typhimurium, S. paratyphi A, S. paratyphi B, S. heidelberg, S. newport, S. choleraesuis, S. oranienburg, S. infantis, S. dublin,

S. enteritidis, S. anatum, S. newlands, P. mirabilis и P. vulgaris, E.coli, Enterococcus spp., Staphylococcus spp., P. aeruginosa


Кишечные инфекции - Школа доктора Комаровского

Производство

Организация производства лечебно-профилактических бактериофагов осуществляется согласно действующим государственным санитарным правилам с учетом требований системы обеспечения качества надлежащей практики производства. Вместе с тем имеются определенные особенности в комплектации и размещении производственных помещений.

Для работы со штаммами бактерий, выделенных из разных источников (патологического материала и объектов внешней среды), и для выделения фагов из патологического материала и объектов внешней среды (почва, сточные воды и т.д.) необходимы изолированные от производства боксы для проведения микробиологических исследований.

Обязательными начальными этапами работы являются:

  • выделение чистых культур перспективных штаммов бактерий (т.е. кандидатов в производственные штаммы бактерий);
  • выделение вирулентных бактериофагов для пополнения коллекции «маточных» фагов.

В производственной зоне должны быть предусмотрены  раздельные микробиологические боксы для работы с производственными бактериальными штаммами и маточными фагами.

При производстве фаговых препаратов проводят валидацию технологического процесса, технологического оборудования, сырья и методов контроля. Все исходные материалы и сырье, используемые при производстве, должны иметь документы, подтверждающие их качество. Вспомогательные вещества, входящие в состав лекарственных средств с лечебно-профилактическими бактериофагами, должны быть разрешены к медицинскому применению и использоваться в дозах, не вызывающих токсические, аллергические или иные нежелательные реакции у человека.


Что делать при пневмонии. Как определить пневмонию. Пневмония легких чем опасна?

Питательные среды

Производственные питательные среды не должны содержать антибиотиков и компонентов, вызывающих аллергические или иные нежелательные реакции у человека. Питательные среды должны обладать хорошими ростовыми свойствами и быть стерильными. Сырье, реактивы и реагенты, используемые при производстве питательных сред, должны быть пригодны для соответствующих целей и их качество должно быть  подтверждено документально.

Похожие темы:
Амоксиклав и клацид пневмония
Пневмония у черепах рентген
Как быстро можно вылечить пневмонию

Для включения в фармакопейную статью рекомендуются следующие питательные среды: мясопептонный бульон  (МПБ) и мясопептонный агар (1,5 – 2 %) или бульон и агар Хоттингера (1,5 – 2 %) с необходимыми добавками в зависимости от специфических потребностей бактерий-мишеней фаговых препаратов. Возможно использование других питательных сред специального назначения, например, для возбудителей особо опасных инфекций.

Требования к производственным штаммам

Производственные штаммы бактерий-продуцентов бактериофагов выделяют от больных гнойно-септическими или кишечными инфекциями и получают из бактериологических диагностических лабораторий (желательно расположенных в регионах реализации и потребления лечебно-профилактических бактериофагов). Коллекция производственных штаммов бактерий, используемых в производстве бактериофагов, должна ежегодно обновляться свежевыделенными штаммами от больных не менее чем на одну треть.


Пневмония/ воспаление легких. Как, чем и зачем лечить пневмонию.

Производственные штаммы бактерий должны обладать типичными для каждого вида морфологическими, культуральными, биохимическими и антигенными свойствами, не продуцировать энтеротоксины и не содержать умеренных бактериофагов в своем геноме.

Похожие темы:
Анемия как симптом пневмонии
Доклад пневмония у детей
Нетипичная пневмония что это такое

Производственные штаммы бактерий должны лизироваться маточными фагами по методу Аппельмана в титрах не менее чем на 1-2 порядка выше показателей специфической активности конечного продукта. При этом стабильность лизиса должна сохраняться после (48 ± 3) ч инкубирования при температуре 37 оС.

Производственные штаммы бактерий хранят в специальных изолированных помещениях в лиофилизированном состоянии в ампулах при температуре 2 — 8 оС в течение 10 лет и в пробирках с 0,4 — 0,7 % агаризованной питательной средой (на основе гидролизата Хоттингера или МПБ) под стерильным вазелиновым маслом при температуре 2 — 8 оС не более 1 года при регулярном пересеве каждые 2 — 3 мес.


Клебсиелла (klebsiella). Лечение, симптомы. Клебсиелла у детей

Контрольные штаммы бактерий. При определении специфической активности готовых препаратов бактериофагов в качестве контрольных отбирают штаммы из коллекции производственных штаммов бактерий. Они не должны использоваться при производстве данной серии препарата.

Похожие темы:
Лечение пневмоний вс рф
Реферат сестринская помощь при пневмонии
Лечение пневмонии в стадии разрешения

Маточные бактериофаги. Для получения фаговых препаратов используются только вирулентные бактериофаги. Их выделяют из природных источников – клинического материала, сточных вод, почвы, пассируя на штаммах гомологичных видов бактерий – свежевыделенных и производственных. Подбирают высоко активные расы (штаммы) фагов к слаболизирующимся и фагорезистентным штаммам бактерий. Пополнение производственных фаговых рас различными штаммами из природных источников позволяет преодолевать первичную фагоустойчивость возбудителей.

Маточные бактериофаги должны включать только вирулентные фаги с широким диапазоном действия по отношению к штаммам гомологичного вида бактерий, обладать высокой активностью, стабильностью лизиса, специфической направленностью антимикробного действия и высокой «урожайностью». Характеристика кандидатных фаговых рас (штаммов) при отборе может быть дополнена электронно-микроскопическим изучением их морфологии и другими современными молекулярно-биологическими методами (например, методом секвенирования – определения последовательности фаговой ДНК). Хранение производственной коллекции бактериофагов осуществляется на гомологичных бактериальных штаммах при температуре от 2 до 8 оС в течение 5 лет с ежегодным пересевом.

Работа с производственными штаммами бактерий и бактериофагов, а именно регулярное пополнение производственных бактериальных штаммов за счет клинических изолятов и подбор к ним фаговых рас из природных источников, обеспечивает возможность адаптации лечебно-профилактических бактериофагов к циркулирующим возбудителям бактериальных инфекций. Таким образом, возможен выпуск производственных серий бактериофагов целевого назначения. Например, при вспышке или в очаге инфекции, обусловленной фагоустойчивым возбудителем, передача на производство эпидемически значимого бактериального штамма позволит адаптировать препарат из бактериофагов к конкретным эпидемиологическим условиям.

Диапазон действия лечебно-профилактических бактериофагов, их активность в отношении современных возбудителей бактериальных инфекций во многом зависят от организации сбора клинических штаммов.

Краткое описание технологического процесса

Производственный процесс включает следующие основные этапы: работа с возбудителями гнойно-септических и кишечных бактериальных инфекций, подбор к ним активных фаговых рас, работа с коллекцией производственных бактериальных штаммов, регулярно пополняемых свежевыделенными бактериями.

Культивирование бактериофагов проводят в реакторах (ферментерах) путем посева производственных штаммов бактерий и маточных фагов, содержащих несколько высокоактивных фаговых рас. После завершения процесса фаголизиса для очистки фаголизатов от фрагментов бактериальных клеток, их метаболитов, в том числе энтеротоксинов и белковых компонентов питательной среды, культуральную суспензию пропускают через микрофильтрационные установки. Полученный фаголизат подвергают ультрафильтрации и концентрированию с последующей стерилизующей фильтрацией. Далее из полученного стерильного концентрата фаголизатов готовят жидкий препарат путем разведения 0,9 % раствором натрия хлорида со стабилизаторами или получают лиофилизированную биомассу, предназначенную для получения таблеток (лиофилизируя концентрат фаголизатов при соответствующих условиях).

В процессе производства бактериофагов оценивают качество исходных, промежуточных и окончательных продуктов на следующих основных этапах и тестах.

  1. Подготовка производственных штаммов бактерий – контроль посевных культур бактериальных штаммов-продуцентов:

а) на чистоту;

б) типичность биологических свойств;

в) на отсутствие лизогении.

  1. Подготовка маточных бактериофагов – контроль маточных бактериофагов:

а) на фаговых частиц в 1 мл, определяемое методом агаровых слоев по Грациа;

б) на специфическую активность, определяемую титрованием в жидкой питательной среде по методу Аппельмана на посевных бактериальных штаммах;

в) на стабильность лизиса (сохранность полученных результатов лизиса по методу Аппельмана) в течение 48 ч инкубации при температуре (37 ± 1) оС;

г) на стерильность.

В завершающей стадии культивирования в реакторах наступление полного фаголизиса определяют визуально по отсутствию видимого бактериального роста.

По мере завершения очистки фаголизатов методом ультрафильтрации, концентрирования и стерилизующей фильтрации проводится определение следующих показателей: рН, стерильность, специфическая активность по методу Аппельмана, аномальная токсичность.

При производстве комбинированных препаратов готовые монофаги  соединяют в реакторах при соблюдении асептических условий.

Для получения жидкого препарата после финальной стадии бактериофаг разливают по флаконам и укупоривают.

Для получения препаратов в таблетках:

а) в концентрированный бактериофаг добавляют стабилизаторы и лиофилизируют. Сухую массу бактериофага контролируют в тестах на специфическую активность и микробиологическую чистоту;

б) после добавления наполнителей проводится таблетирование. В качестве вспомогательных веществ используют пектин, кальция глюконат, глюкозу, тальк, кальция стеарат. Таблетки проверяют на ломкость, отсутствие дефектов (сколов, расслоений), определяют среднюю массу таблеток;

в) после завершения фасовки таблеток готовый продукт контролируют по всем показателям: описание (внешний вид таблеток), подлинность и специфическая активность, средняя масса таблетки, распадаемость, потеря в массе при высушивании, микробиологическая чистота, аномальная токсичность.

К специфическим методам исследования, используемым для характеристики лечебно-профилактических бактериофагов, относятся методы Аппельмана и Грациа.

Определение специфической активности бактериофагов и стабильности лизиса по методу Аппельмана

Специфическую активность бактериофагов и стабильность лизиса по методу Аппельмана определяют с использованием гомологичных тест-штаммов бактерий (контрольных штаммов). Показатели специфической активности указывают в фармакопейной статье. Контрольные штаммы отбирают из коллекции производственных штаммов бактерий. Они не должны использоваться при производстве данной серии препарата. Состав питательного бульона указывают в фармакопейной статье на определенный  фаговый препарат.

Методика анализа

Испытания проводят с соблюдением правил асептики. В пробирках, содержащих по 4,5 мл питательного бульона (МПБ, бульона Хоттингера), готовят ряд последовательных десятикратных разведений бактериофага от 10-1 до 10-6— 10-9  (в зависимости от показателей специфической активности, заложенных в фармакопейную статью на конкретный фаговый препарат) с обязательной сменой пипеток при каждом разведении. Для приготовления первого разведения добавляют 0,5 мл образца препарата к 4,5 мл бульона. В качестве контроля используют пробирку с 4,5 мл бульона без фага. После этого во все пробирки с полученными разведениями бактериофага пипеткой вносят по 0,03 мл взвеси суточной агаровой культуры бактерий, содержащей 109 микробных клеток в 1 мл по стандарту мутности (10 МЕ). Результаты учитывают через (18 ± 1) ч инкубации при температуре (37 ± 1) °С. Возможно изменение длительности инкубации в зависимости от видовых особенностей роста бактериальной мишени фагового препарата, о чем указывают в фармакопейной статье. Результат определяют по отсутствию видимого роста бактерий в присутствии бактериофага. Активность бактериофага обозначают отрицательной степенью десяти, где степень указывает последнее разведение бактериофага, в котором рост контрольного штамма визуально не наблюдается. Для определения стабильности лизиса срок инкубации продлевают до 2 сут.

Определение фаговых частиц в 1 мл по методу Грациа (на плотных питательных средах двухслойным методом)

Мясопептонный 1,5 % агар разливают в чашки Петри по (20 ± 2) мл (первый слой). Перед использованием чашки с агаром подсушивают в перевернутом виде с прикрытой крышкой при температуре (37 ± 1) °С в течение 30-60 мин. Для титрации используют посевные штаммы бактерий. Готовят десятикратные последовательные разведения маточного фага в МПБ по методу Аппельмана от 10— 1 до 10-8 (10-9 или выше, в зависимости от специфической направленности бактериофага). Затем смешивают 1 мл разведенного фага из пробирок с разведениями 10-6, 10-7, 10-8 разведений с 5 мл расплавленного и остуженного до температуры 45 °С 0,7 % мясопептонного агара. Затем добавляют (0,2 ± 0,05) мл 18-часовой бульонной культуры посевного штамма, подготовленного из суточной культуры, выращенной на плотной питательной среде, в соответствии с требованиями к производственным бактериальным штаммам. Содержимое пробирок быстро перемешивают   вращением пробирок между ладонями, чтобы не произошло застывания агара, и выливают вторым слоем на поверхность 1,5 % агара в чашках Петри. После застывания верхнего слоя агара чашки инкубируют в течение 18 ч при температуре (37 ± 1) °С. Для определения концентрации фаговых частиц в маточном фаге подсчитывают количество негативных колоний (прозрачные пятна на матовом фоне глубинного роста бактерий) в каждой чашке, умножают на коэффициент разведения фага в пробирке с соответствующим разведением. Затем вычисляют среднее значение 3 определений.

Данная методика используется при отборе перспективных фаговых рас в коллекцию маточных бактериофагов. От вида бактериофагов зависит порядок применяемых в опыте разведений.

рН

Показатель pH фаголизата должен составлять от 6,6 до 7,8. Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Стерильность

Очищенный и концентрированный фильтрат фаголизатов должен быть стерильным. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Стерильность».

Аномальная токсичность

Введение мышам очищенного фильтрата фаголизатов не должно вызывать гибель животных. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность». Тест-доза препарата бактериофага в объеме 1 мл вводится животным подкожно.

Испытания

Проводят необходимые испытания, предусмотренные для лечебно-профилактических бактериофагов в соответствующей лекарственной форме.

Описание

Приводится описание физических свойств соответствующей лекарственной формы лекарственного средства. Испытание проводят визуально.

Подлинность

препарата подтверждается его специфической активностью.

рН

(для растворов) – от 6,6 до 7,8. Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Извлекаемый объем

(для растворов) – не должен быть менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем для лекарственных форм для парентерального применения».

Средняя масса и отклонения от средней массы

(для таблеток). Приводятся требования к средней массе и максимально допустимые отклонения от средней массы в соответствии с ОФС «Однородность массы дозированных лекарственных форм».

Время распадаемости

(для таблеток) не должно превышать 30 мин, если в фармакопейной статье на определенный фаговый препарат нет других указаний. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Распадаемость таблеток и капсул».

Бактериофаги, выпускаемые в виде кишечнорастворимых таблеток, не должны распадаться в течение 1 ч в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты и после промывания водой должны распадаться в растворе натрия гидрокарбоната (рН от 7,5 до 8,0) в течение 30 мин.

Потеря в массе при высушивании

(для таблеток) должна быть не более 4,0 %, если нет других указаний в фармакопейной статье. Определение проводят в соответствии с ОФС «Потеря в массе при высушивании» или ОФС «Определение воды».

Стерильность (для растворов)

Препарат должен быть стерильным (категория 5БII согласно ОФС «Микробиологическая чистота»). Испытание стерильности проводят методом прямого посева или мембранной фильтрации в соответствии с ОФС «Стерильность».

Микробиологическая чистота

(для таблеток) должна соответствовать категории 5.2Б согласно ОФС «Микробиологическая чистота»:

  • общее число непатогенных аэробных бактерий — не более 102 КОЕ в единице препарата (1 г);
  • отсутствие дрожжевых и плесневых грибов в единице препарата (1 г);
  • отсутствие энтеробактерий в единице препарата (1 г);
  • отсутствие Pseudomonas aeruginosa в единице препарата (1 г);
  • отсутствие Staphylococcus aureus в единице препарата (1 г).

Испытание проводят в соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Аномальная токсичность

Введение мышам подкожно 1 мл препарата бактериофага не должно вызывать гибель животных. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность». Пробоподготовку препаратов указывают в фармакопейной статье на препарат.

Специфическая активность

Активность бактериофага обозначают отрицательной степенью десяти, где степень указывает последнее разведение бактериофага, в котором рост контрольных штаммов бактерий визуально не наблюдается. Нормативные требования, в том числе количество используемых контрольных штаммов (не менее 10 штаммов для монопрепаратов), указывают в фармакопейной статье на препарат. Определение проводят титрованием в жидкой питательной среде по методу Аппельмана. Методику и подготовку проб указывают в  фармакопейной статье на конкретный фаговый препарат.

Упаковка и маркировка

В соответствии сОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты». В маркировке лекарственной формы «раствор» должна быть предусмотрена предупредительная надпись «При помутнении не применять».

Транспортирование

При температуре от 2 до 8 °С, допускается при температуре от 9 до 25 оС в пределах 1 мес.

Хранение

В сухом, защищенном от света и недоступном для детей  месте, при температуре от 2 до 8 °С.

Скачать ОФС.1.7.1.0002.15 Бактериофаги лечебно-профилактические


Использованные источники: http://pharmacopoeia.ru/ofs-1-7-1-0002-15-bakteriofagi-lechebno-profilakticheskie/

.


2
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
poddon-m.ru

Комментарии закрыты.